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Q1:测出值超出标曲范围怎么办?
A1:将样本稀释后再测,摸索一下最适的稀释浓度。
Q2:BCA使用注意事项。
A2:(1) 需96孔酶标板,酶标仪一台,测定波长为A562 nm最佳。也可以使用分光光度计测定,但测定时,需根据比色皿的最小检测体积,适当 加大BCA工作液的使用量使不小于最小检测体积,样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时, 每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
(2) 长期不用时,Reagent A/B可置于2-8℃保存,如发现细菌污染则应丢弃。Reagent A试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可37℃孵育使 其完全溶解, 不影响使用。
(3) 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景,请使用诺唯赞生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
(4) 进行BSA标准蛋白标准曲线绘制时,使用样品蛋白的溶解液溶解BSA最优。
(5) BCA试剂对去污剂不敏感,可兼容SDS 3%、Tween-20 5%、EDTA 15 mM、无EGTA、Triton X-100 5%;对还原剂比较敏感,可兼容 DTT 0.5 mM、β-巯基乙醇 0.07%。
(6) BCA工作液配制过程中吸取Reagent A液和Reagent B液务必更换吸头,工作液新鲜配制后应立即使用,长时间放置会影响检测灵敏度。
(7) 最好使用塑料比色皿,如使用玻璃比色皿或石英比色皿,使用后立即用少量95%的乙醇清洗。
(8) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。