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Q1:测出值超出标曲范围怎么办?
A1:将样本稀释后再测,摸索一下最适的稀释浓度。
Q2:Brandford使用注意事项。
A2:(1) Bradford法对去污剂敏感,受高浓度去垢剂影响。需确保SDS浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.2%,Tween-20低于0.1%,NP-40低于 0.1%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒 (Vazyme # E112)和Bradford耐去垢剂型蛋白浓度测定试剂盒(Vazyme # E211)。
(2) 染色液使用前请混匀。
(3) 将染色液放置到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。
(4) 由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定程度后,颜色反应并不成线性增加,因此标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应 按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
(5) 反应在5分钟后显色充分,在10分钟后可能开始出现沉淀。故建议在加入染色液后5-10分钟内完成检测,误差较小。
(6) 推荐使用塑料比色皿。如使用玻璃比色皿或石英比色皿,使用后立即用少量95%的乙醇清洗。