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Q1:做基因编辑,酶切验证编辑成功,但是测序结果却不正确(假阳性)。
A1:编辑完成之后,提取基因组,做PCR扩增目的片段,利用T7核酸内切酶进行验证,有目的条带,连T载做转化,菌检测序。建议在菌检结束之后,利用菌检产物再做一次酶切验证是否将有效片段连入载体,如果酶切验证是阳性的,则可以测序。
Q2:该实验反应温度的上限是多少?
A2: 反应温度超过42℃时,会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55℃,否则会导致酶活性降低。