Q1：ECL能否不压胶直接照。

A1：如果使用凝胶成像仪，可以直接照。

Q2：ECL工作液怎么配置？双蒸水可以用ddH₂O代替么？有试用装么？可以不用X光片吗？

A2：(1) 新鲜配制ECL工作液：Buffer A和Buffer B按1:1混合后，用双蒸水10倍稀释，即为ECL工作液。须立即使用；

(2) 双蒸水：两次蒸馏冷凝的水；ddH₂O：就是二次蒸馏水；

(3) 没有试用装；

(4) 建议老师按说明书的来，直接放到仪器里面曝光也是可以的（把western的膜有蛋白的那面朝上，放在拍照的仪器里面，然后把A液B液等体积混匀，滴加在膜上，使溶液覆盖整个膜，拍照）。

Q3：ECL使用注意事项。

A3：(1) ECL工作液配制过程中吸取ECL Substrate A 液和Peroxide Solution B液时务必更换吸头，工作液新鲜配制后应立即使用，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

(2) Peroxide Solution B液含有氧化剂，易被还原而失效。各溶液使用后，请盖紧瓶盖，以防失效。

(3) ECL发光液是HRP的显色底物，因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。 

(4) 尽量避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成背景增加。

(5) 应使用高质量保鲜膜。质量较差的保鲜膜可能会淬灭荧光或由于含有杂质而污染印迹膜造成曝光背景值偏高。

(6) 根据目的蛋白丰度不同，曝光时间可能是数秒至数小时。曝光时间不足会导致目的条带不明确，曝光时间过长会使背景加深。

(7) 叠氮化钠（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。 

(8) 由于发光液极其灵敏，推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000-1:4000，二抗1:2000-1:5000。抗体浓度过高可能造成高背景或没有 条带。

(9) ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液均对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。为了您的 安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。