Q1：如果出现支原体污染该如何补救？

A1：若发现细胞存在支原体污染，建议直接丢弃，防止污染其它细胞。同时，复苏一支同批次冻存的细胞进行检测。如果发现是支原体阳性，则将该批次细胞全部丢弃。如果细胞很珍贵，可尝试使用Myco-Off支原体清除试剂(Vazyme #D103)，对细胞进行挽救。

Q2：如何处理支原体严重污染的细胞？

A2：对于支原体严重污染的细胞，如果7天不能清除干净，推荐延长处理时间。

Q3：支原体清除试剂盒，是否可以用于液氮罐清洗时去除支原体？

A3：理论上可以用于，但是用量较大，建议使用物理方法清除污染。

Q4：如何减轻支原体清除试剂对细胞的毒性。

A4：经验证在大多数情况下，本产品对细胞几乎无毒性，对于部分敏感细胞，若细胞出现生长缓慢，可以将试剂按1:2000进行稀释使用。

Q5：MycoBlue^TM Mycoplasma Detector的灵敏度是多少？如何保证检测灵敏度？

A5：MycoBlue^TM Mycoplasma Detector可从1 μl培养上清中准确检出至少500 cfu的支原体，即灵敏度为5 × 10⁵ cfu/ml。通常情况下，培养上清中的支原体含量在10⁶-10⁸ cfu/ml之间，该试剂可以满足绝大多数实验的需要。据文献报道，单个支原体感染细胞后，在3-5天内可扩增至10⁶ cfu/ml。因此，尽量在换液或传代3天后再进行检测，以使上清中的支原体含量增多，提高检出率。

Q6：加入培养基上清后，反应液即变色；或者反应结束后，反应液颜色呈现紫色与蓝色以外的颜色，是什么原因？如何解决？

A6：在极少数情况下，培养基成分会对MycoBlue试剂的颜色产生干扰，比如Cell Boost 5(Hyclone)会使MycoBlue试剂呈现出粉红色。

处理方法：

(1) 取少量培养基上清或细胞悬液，500g离心5min，收集上清；

(2) 高速离心(>12,000g) 5 min，使上清中可能存在的支原体沉淀。弃掉大部分上清，保留约50 μl；再加入950 μl无菌水。用移液器吹打混匀；

(3) 重复步骤(2)两次，弃掉大部分上清，保留约50 μl；

(4) 取1 μl进行检测。

Q7：操作过程中如何避免出现假阳性？

A7：只要稍加注意，不会出现假阳性。最重要的是反应结束后，不能打开管盖，否则反应产物会产生气溶胶，导致后续检测出现假阳性。另外，加样时注意更换枪头，并将阳性对照放在最后一管加入，也可以进一步降低假阳性出现的风险。

Q8：MycoBlue^TM Mycoplasma Detector可以检测多少种支原体？

A8：MycoBlue^TM Mycoplasma Detector可以准确检出28种支原体：

超过95%以上的细胞是被这8种支原体所污染