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Q1:该试剂盒能够用来提取普通植物样本的RNA吗?操作上有什么不同呢?
A1:可以提取。在第二步获得上清之后,无需加入0.5倍体积无水乙醇即可加入到gDNA吸附柱上,弃柱子,取滤液加入0.5倍体积乙醇后加入到RNA吸附柱上,后续步骤和试剂盒说明书保持一致。
Q2:提取不到RNA或者RNA产量低。
A2:(1) 样本破碎裂解不充分。液氮研磨时,确保研磨充分,并迅速转移至预先准备好的裂解液中。
(2) 起始投入量过高或过低。样本起始投入量建议按照说明书进行操作。
(3) 洗脱不充分。可以加入70-90℃预热的RNase-free ddH2O,延长放置时间。
(4) RNA降解。样本保存不当或者反复冻融,提取过程或者电泳过程存在RNase污染。
Q3:提取的RNA有基因组DNA污染。
A3:(1) 样本投入量过多。减少样本起始投入量。
(2) 逆转录时选择含有基因组去除模块的逆转录试剂。
(3) 设计引物时选用垮内含子的引物,从而避免基因组DNA模板参与扩增反应。
(4) 用Dnase I进行膜上消化清除DNA污染。