Q1：扩增产物少或没有扩增

A1: ① 血液、血卡、拭子等直扩类实验时，确认PCR程序预变性条件为95℃/5 min，以充分释放模板。

② 使用高质量的引物。检查引物是否降解，确认引物终浓度为0.2 μM。

 ③ 增加PCR循环数。

④ 降低退火温度(间隔1 ~ 3℃)，必要时进行退火温度梯度测试。确认退火时间为90 sec，必要时可延长退火时间至3 min。

 ⑤ 检查单对引物的扩增性能和特异性。

⑥ 使用高质量的模板。确认DNA模板纯度、浓度；增加模板使用量。

⑦ 产物过长，重新设计引物。

⑧ 延长循环内的延伸时间；延长彻底延伸时间。

⑨ 提高低产或缺失扩增子引物使用量。

Q2：存在非特异性扩增

A2: ① 减少循环数。

② 提高退火温度。

③ 减少引物使用量。

④ 重新设计引物。

⑤ 降低酶量。

Q3: 电泳时条带模糊

A3: ① 减少循环数(每次减少3个循环)。

② 减少起始模板量。

③ 延长彻底延伸步骤时间至15 - 30 min。 ④ 降低电泳电压，更换新的电泳缓冲液。