Q1：使用植物叶片作为样本时如何处理样品？

A1：推荐使用50μl反应体系并使用直径大小为0.5-3mm的幼嫩叶片。较小反应体系和过多的叶片使用量容易导致扩增失败。

Q2：使用植物粗品作为样本时如何处理样品？

A2：可通过调整粗品处理方式和使用量来获得更优扩增效果。可尝试将Plant Direct Lysis Buffer A中的样本捣碎后于室温孵育3min；将加入的模板在0.5-5μl之间调整，或将粗品按1:1-1:10的比例进行稀释后，取1μl作为模板；需注意的是，植物样本和粗品中存在PCR反应抑制成分，加入过多模板容易一致反应导致扩增失败。对于难以扩增的样本，可尝试在Plant Direct Lysis Buffer A中加入终浓度为2%的β-巯基乙醇或10mM的DTT。

Q3：无产物或产物量少。

A3：(1) 核对引物设计，确认引物的纯度和浓度。

(2) 重复实验，确认反应体系配制、反应程序设置无误。

(3) 增加循环数，或延长延伸时间。

(4) 提高Mg²⁺ 浓度。

(5) 设置退火温度梯度，找到合适的退火温度。

(6) 尝试不同的模板用量，增大反应体积或尝试使用BME/DTT。

Q4：有杂带或弥散条带。

A4：(1) 优化引物设计，降低引物浓度。

(2) 尝试提高退火温度或设置退火温度梯度，减少退火时间。

(3) 减少总循环数，延长时间不超过60sec/kb。

(4) 尝试不同的模板用量，增大反应体积或尝试使用BME/DTT。