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Q1:重复性差。
A1:使用荧光定量仪器检测;添加甜菜碱;引物可能有问题。
Q2:环介导的等温扩增引物如何设计及筛选?
A2:环介导的等温扩增引物的设计请参考http://primerexplorer.jp/e/,建议使用V4版本。具体操作手册登录下载。环介导等温扩增引物的初步筛选可参照操作手册,具体需要通过实验来验证最佳引物。
Q3:环介导等温扩增产物可以做酶切鉴定吗?
A3:可以。但是开盖容易造成气溶胶污染,一定要谨慎操作。
Q4:无扩增。
A4:建议多设计几组引物,用实验来验证,选出最佳引物。
Q5:加环引物出现假阳性,不加就正常,是什么原因?
A5:若环引物经验证没有污染,则可能是环引物导致了非特异的扩增,这种情况下建议不使用环引物或者更换别的环引物。