Q1:产量偏低

A1:（1）重新定量投入模板量，确认模板起始量是否正确。若低于下限1 ng，需提高投入模板量。

（2）若模板质量较差，可依据说明书适当提高循环数或使用高质量模板。

（3）请确认每一步体系以及程序是否按照说明书进行，并注意每一步骤中各项操作细节。

Q2:产量偏高

A2:（1）模板投入量是否高于100 ng，若高于，可减少模板投入量；

（2）多重扩增循环数可依据说明书适当降低。

Q3:产物均一度偏低

A3:（1）模板受损严重或PCR环节扩增不充分。请使用高质量模板或将PCR环节中退火延伸时间延长；

（2）AT含量高的扩增子较少：加倍退火延伸时间或将退火温度由60℃降低至58℃；

（3）GC含量高的扩增子较少：在PCR环节的前两个循环中，将退火温度由60℃提升至62℃。

Q4:建议分区操作

A4：PCR产物极易产生气溶胶污染，进而导致实验结果不准确、可信度不高等问题。建议将PCR反应体系配制区和PCR反应区进行物理隔离，使用专用的移液器等设备，并定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理)，以保证实验结果的可信度。